細(xì)胞(bāo)凍(dòng)存程(chéng)序降(jiàng)溫儀介紹與步驟！

    在細(xì)胞培(péi)養檢測(cè)實驗(yàn)在實(shí)驗儀器，培養基等等(děng)工(gōng)作(zuò)上都要耗費不(bù)少的人力(lì)和體(tǐ)力。好(hǎo)在很(hěn)久以前就有(yǒu)高(gāo)人(rén)發(fā)明(míng)了細(xì)胞(bāo)保存(cún)這個實(shí)驗步驟(zhòu)
，將暫時多(duō)出來的(dí)細胞冰(bīng)凍(dòng)保存
，以zui大(dà)程度保(bǎo)存(cún)細胞(bāo)活(huó)力。

一，細(xì)胞冷(lěng)凍(dòng)保存
1.  材料(liào)
：
生長良好(hǎo)之培養(yǎng)細(xì)胞，新鮮(xiān)培養基，DMSO (Sigma D-2650)，無菌(jūn)塑(sù)料(liào)冷凍(dòng)保(bǎo)存(cún)管(guǎn)(Nalgene　5000-0020)，0.  4%(w/v)trypan blue(GibcoBRL15250-061)，血球(qiú)計數(shù)盤(pán)與(yǔ)蓋玻片，細胞凍存(cún)程(chéng)序儀(也(yě)稱為(wéi)程序(xù)降(jiàng)溫(wēn)儀
，品牌上海(hǎi)拓(tuò)紛(fēn))
2.  冷凍保存方法(fǎ)
：
(1)傳統方法: 冷(lěng)存(cún)管(guǎn)置(zhì)於(yú)4 ℃10分(fēn)鐘(zhōng)--->-20 ℃30分鐘--->-80 ℃ 16～18小時(或(huò)隔(gé)夜(yè))--->液氮槽vaporphase長(cháng)期儲(chǔ)存。
-20 ℃不可(kě)超過(guò)1小(xiǎo)時
，以(yǐ)防止胞(bāo)內(nèi)冰晶(jīng)過(guò)大
，造成(chéng)細胞(bāo)大(dà)量(liáng)死(sǐ)亡
，亦可跳過(guò)此步驟(zhòu)直接放(fàng)入(rù)-80 ℃冰(bīng)箱(xiāng)中
，惟存活(huó)率稍(shāo)微(wēi)降低一些。
(2)程(chéng)序(xù)降溫
：利用已設(shè)定程序(xù)的(dí)等速細胞(bāo)凍存(cún)程(chéng)序儀(yí)以-1～-3 ℃/分鐘(zhōng)之(zhī)速度(dù)由室溫降(jiàng)至(zhì)(-80 ℃以下)-120 ℃
，再放(fàng)在(zài)液(yè)氮槽vaporphase長(cháng)期儲(chǔ)存。適用於(yú)懸(xuán)浮(fú)型(xíng)細(xì)胞與hybridoma之保存。
3.  步驟
：
(1)冷(lěng)凍前24-48小時更(gēng)換(huàn)半(bàn)量或(huò)全量培養基(jī)
，使細胞處(chǔ)於指數(shù)生(shēng)長(cháng)期。
(2)配製冷凍保存溶(róng)液(使用前配製(zhì))
：另取一離心管
，加入培養基(jī)，血清(qīng)
，逐(zhú)滴(dī)加入(rù)二甲(jiǎ)基(jī)亞碸(fēng) (DMSO)至20%濃度
，即製(zhì)成雙(shuāng)倍的凍(dòng)存(cún)液
，置(zhì)於室(shì)溫(wēn)下待(dài)用。
(3)離心(xīn)收集(jí)培養(yǎng)之(zhī)細胞
，用加血清的培養基(jī)重(zhòng)懸起(qǐ)細胞
，取少(shǎo)量細胞懸(xuán)浮(fú)液(約0.  1 ml)計(jì)數(shù)細(xì)胞(bāo)濃度(dù)及(jí)凍前(qián)存活率。
(4)取與(yǔ)細(xì)胞懸液等量(liáng)的凍(dòng)存液
，緩(huǎn)慢(màn)逐滴(dī)加入細(xì)胞懸液
，並晃(huǎng)動試(shì)管
，製(zhì)成(chéng)細胞凍存懸液(DMSOzui後濃度為(wéi)5～10%)
，使細(xì)胞(bāo)濃(nóng)度為1～5×106cells/ ml
，混合均匀
，分裝於已標示*之冷凍(dòng)保(bǎo)存管(guǎn)中(zhōng)
，1～2 ml/vial
，並(bìng)取少(shǎo)量(liáng)細胞(bāo)懸浮液(yè)作汙(wū)染檢測。嚴密(mì)封口(kǒu)後
，注明細(xì)胞(bāo)名(míng)稱(chēng)，代數，日期。然(rán)後進(jìn)行(háng)凍存(cún)。

    程(chéng)序控(kòng)製冷(lěng)凍裝置俗稱(chēng)
：程序(xù)降(jiàng)溫(wēn)儀
，也稱(chēng)為(wéi)程序冷(lěng)凍(dòng)儀(yí)，胚(pēi)胎冷凍儀，細(xì)胞(bāo)冷(lěng)凍儀(yí)，程(chéng)控(kòng)降(jiàng)溫(wēn)儀；廣泛用於凍(dòng)存細(xì)胞，胚(pēi)胎等(děng)。采(cǎi)用微(wēi)機控(kòng)製(zhì)技術
，軟件
，能(néng)較準(zhǔn)確地控(kòng)製液氮(dàn)的施放量
，從(cóng)而保(bǎo)證(zhèng)被凍存(cún)的生物製品(pǐn)以適(shì)宜的冷凍(dòng)速率降溫(wēn)冷凍。該儀器(qì)具有操作(zuò)簡便(biàn)，人(rén)機(jī)界麵清楚(chǔ)。 

  我國臨床(chuáng)低溫(wēn)醫(yī)學工作發展迅速
，促進(jìn)了移植(zhí)醫學的發展
，特別是在(zài)骨(gǔ)髓(suǐ)，造 血幹細(xì)胞(bāo)，皮(pí)膚，角(jiǎo)膜(mó)，內(nèi)分泌腺體，以及(jí)血管和瓣(bàn)膜等(děng)的冷凍保存和(hé)移(yí)植(zhí)應(yīng)用取 得了顯著(zhù)成績。成(chéng)功的造血(xiě)幹細胞移植依(yī)賴(lài)於造(zào)血幹細胞活(huó)力的保(bǎo)存。生物樣(yàng)品(pǐn)在 降溫冷(lěng)凍過(guò)程(chéng)中
，當由液(yè)態向(xiàng)固態(tài)變(biàn)化的相(xiāng)變期內會(huì)釋放一(yī)定熱量
，使其(qí)溫度(dù)回升
， 不控製(zhì)降(jiàng)溫(wēn)速率(shuài)的冷凍過(guò)程將會導致組(zǔ)織(zhī)細(xì)胞死(sǐ)亡(wáng)。準(zhǔn)確(què)地(dì)測(cè)定生(shēng)物樣品的相變點
， 用(yòng)微(wēi)機編製降(jiàng)溫程序
，以便在(zài)樣品相(xiāng)變時加大(dà)液氮(dàn)輸入量
，克(kè)服(fú)相(xiāng)變(biàn)樣(yàng)品(pǐn)溫(wēn)度(dù)的回(huí) 升
，使細胞安(ān)全而(ér)迅速(sù)地(dì)度(dù)過相變(biàn)期(qī)
，這(zhè)是(shì)提(tí)高(gāo)被凍樣品(pǐn)成(chéng)活(huó)率的關(guān)鍵環節。

 ☆主(zhǔ)要技術(shù)指(zhǐ)標☆
     溫(wēn)度控製範圍:40℃~-180℃.
     溫度(dù)精(jīng)度(dù):    誤(wù)差<1℃
     降(jiàng)溫速度:    0.1℃/分(fēn)~50℃/分(fēn)範(fàn)圍內(nèi)可選
     升(shēng)溫(wēn)速度:    0.1℃/分~30℃/分(fēn)範(fàn)圍內可選(xuǎn)

☆儀器結構☆:本儀器(qì)由以下四(sì)部(bù)分構(gòu)成(chéng)(標(biāo)準配(pèi)置):
溫控係(xì)統
：在(zài)機箱(xiāng)上配置高(gāo)精度智(zhì)能溫控(kòng)器
，該(gāi)溫控器(qì)通(tōng)過RS485通(tōng)訊協(xié)議(yì)和電腦連(lián)接(jiē)；
電腦軟(ruǎn)件
：在電(diàn)腦中(zhōng)運行(háng)上位機軟件
，即(jí)可(kě)設(shè)定控溫程序
，對(duì)箱體控(kòng)溫(wēn)；
冷凍箱(xiāng):  內外(wài)全不鏽(xiù)剛(gāng)結構.冷(lěng)凍容機(jī)不(bù)小(xiǎo)於200*200*200毫米(mǐ).可同(tóng)時容(róng)納冷凍管160個或(huò)血袋8個(gè).
液(yè)氮罐(guàn)及(jí)液(yè)氮(dàn)加(jiā)壓(yā)器(qì): 液氮(dàn)加壓器安裝(zhuāng)在30立(lì)升的液氮罐(guàn)上,使(shǐ)罐內自增壓(yā),調(tiáo)節閥保(bǎo)持(chí)壓(yā)力穩定(dìng).
☆軟(ruǎn)件(jiàn)功(gōng)能☆
1，顯示功(gōng)能:
運行(háng)顯示(shì)如圖
：.每步(bù)操(cāo)作(zuò),每(měi)個(gè)功(gōng)能都(dū)有屏幕(mù)顯示(shì).實(shí)時(shí)顯(xiǎn)示(shì)儀器工(gōng)作狀態﹑溫(wēn)度數據和(hé)曲(qū)綫(xiàn).

2， 編程(chéng)功(gōng)能:
可編(biān)製(zhì)任意(yì)段(duàn)數(shù)的用戶程序.計算機按(àn)照用(yòng)戶程序控製冷凍(dòng)過程.用(yòng)戶程(chéng)序可方便地編製(zhì)﹑修(xiū)改﹑存儲(chǔ)﹑調出.開(kāi)機自(zì)動調出當(dāng)前用戶程(chéng)序(xù).
3，運行控(kòng)製功能(néng):
隨機(jī)恒(héng)溫功能: 可(kě)隨時進入,隨時解除恒溫(wēn)。
自動控(kòng)製(zhì)
：設定(dìng)程序(xù)後
，可*自動運行。
手(shǒu)動控(kòng)製: 程(chéng)控(kòng)時手(shǒu)控可(kě)參(cān)與控製(zhì).也(yě)可(kě)*手控。
4，數據(jù)處理(lǐ)功能(néng)
每(měi)次(cì)冷凍的全(quán)部數據和有關(guān)信息(xī),都能自動形成一(yī)個(gè)數(shù)據文件(jiàn)存儲下(xià)來(lái);
溫度數據(jù)和速度(dù)可(kě)按時間(jiān)間隔(gé)列表(biǎo)或(huò)顯示溫(wēn)度曲(qū)綫(xiàn).
可迅(xùn)速(sù)方便(biàn)地雙(shuāng)向(xiàng)檢(jiǎn)索已存(cún)入的(dí)數據文件(jiàn);
溫(wēn)度曲(qū)綫可(kě)局部放(fàng)大,便(biàn)於研究關鍵段的(dí)細微變化;
還有(yǒu)一(yī)些功(gōng)能恕不(bù)一一(yī)列(liè)出,這(zhè)些功能如(rú)能配(pèi)合(hé)使用,將為(wéi)您(nín)的冷(lěng)凍帶(dài)來(lái)極(jí)大(dà)的方便.
5，軟件(jiàn)升級
  隨(suí)著公司軟件(jiàn)不斷的(dí)更新(xīn),用戶可享受免費升(shēng)級(jí)服(fú)務.
 
詳(xiáng)細配(pèi)置清(qīng)單