超低溫冰(bīng)箱(xiāng)在微生物(wù)冷凍(dòng)保(bǎo)存的應用(yòng)

    將微生物(wù)處(chǔ)於(yú)冷(lěng)凍(dòng)狀(zhuàng)態，使其(qí)代(dài)謝(xiè)作用停止以達到保藏(cáng)的目(mù)的。大(dà)多數(shù)微(wēi)生(shēng)物(wù)都能通過(guò)冷凍進(jìn)行(háng)保存(cún)，細胞體積大者要比小(xiǎo)者對低(dī)溫(wēn)更(gēng)敏(mǐn)感，而(ér)無細胞壁者則比(bǐ)有細胞壁(bì)者敏感(gǎn)。其原(yuán)因與低溫(wēn)會(huì)使(shǐ)細胞(bāo)內的(dí)水分(fēn)形(xíng)成(chéng)冰晶，從而(ér)引(yǐn)起細胞(bāo)，尤(yóu)其是細(xì)胞(bāo)膜的(dí)損傷(shāng)。進行冷凍時，適當采(cǎi)取(qǔ)速凍(dòng)的(dí)方法，可(kě)因產生的冰晶小而(ér)減少對細胞的損傷。當(dāng)從(cóng)低(dī)溫下移(yí)出(chū)並(bìng)開(kāi)始(shǐ)升(shēng)溫時，冰晶又(yòu)會(huì)長大，故快速(sù)升溫(wēn)也(yě)可減(jiǎn)少(shǎo)對細胞(bāo)的損傷。冷凍(dòng)時(shí)的(dí)介(jiè)質(zhì)對(duì)細胞(bāo)的損(sǔn)傷也有顯著的影響(xiǎng)。例(lì)如，0.5 mol / L左右的甘油或(huò)二甲亞(yà)楓(fēng)可透(tòu)入(rù)細(xì)胞，並(bìng)通(tōng)過(guò)降低(dī)強(qiáng)烈的脫(tuō)水作(zuò)用(yòng)而(ér)保(bǎo)護細(xì)胞；大分子(zǐ)物(wù)質如(rú)糊(hū)精，血清(qīng)蛋白，脫脂(zhī)牛(niú)奶(nǎi)或(huò)聚乙烯(xī)吡(pǐ)咯烷酮(tóng)（PVP）雖不(bù)能(néng)透入細胞(bāo)，但可通(tōng)過與(yǔ)細(xì)胞表(biǎo)麵結合的(dí)方式而(ér)防止(zhǐ)細(xì)胞膜受凍(dòng)傷(shāng)。因此(cǐ)，在(zài)采用(yòng)冷(lěng)凍法保藏(cáng)菌種(zhǒng)時(shí)，一般應加(jiā)入(rù)各種(zhǒng)保(bǎo)護劑以提高(gāo)培(péi)養(yǎng)物的(dí)存(cún)活(huó)率。
　　一般來(lái)說，保藏溫度(dù)越低(dī)，保(bǎo)藏效果越(yuè)好。在常(cháng)用的(dí)冷凍(dòng)保藏方(fāng)法中，液氮(dàn)保(bǎo)藏(cáng)可(kě)達(dá)到(dào)-196℃。因此，從適用的微(wēi)生物範圍(wéi)，存(cún)活(huó)期限(xiàn)，性狀的(dí)穩(wěn)定性等(děng)方麵來(lái)看(kàn)，該方(fāng)法(fǎ)在迄(qì)今(jīn)使(shǐ)用(yòng)的各種微生(shēng)物保藏(cáng)方法中是較理想(xiǎng)的一種。但液(yè)氮保藏需使用器(qì)具，一(yī)般(bān)僅(jǐn)適合一些專業保藏(cáng)機構采用。與此(cǐ)相應，超低(dī)溫冰(bīng)箱(xiāng)保藏使用更為(wéi)普遍。例(lì)如(rú)在(zài)各種基(jī)因工程手(shǒu)冊中(zhōng)，一般(bān)都推(tuī)薦在(zài)-70℃超低溫冰箱(xiāng)中保存菌(jūn)株(zhū)或細(xì)胞的(dí)某些特殊生(shēng)理(lǐ)狀態（添加甘油(yóu)做保護劑），例(lì)如(rú)經(jīng)誘導(dǎo)建(jiàn)立了(liǎo)感受態的細胞。在沒(méi)有超(chāo)溫(wēn)冰箱(xiāng)的條件(jiàn)下(xià)，也(yě)可(kě)利(lì)用(yòng)-20~30℃的普(pǔ)通(tōng)冰箱保(bǎo)存菌種。但應注(zhù)意加(jiā)有保護(hù)劑(jì)的細胞混合(hé)物(wù)的(dí)共(gòng)融(róng)點(diǎn)處在這(zhè)個溫(wēn)度(dù)範(fàn)圍(wéi)內(nèi)，常會由於冰箱可能產(chǎn)生的微小溫度(dù)變(biàn)化引(yǐn)起培(péi)養(yǎng)物的(dí)反(fǎn)復融化和再(zài)結(jié)晶，而(ér)對菌體形(xíng)成強烈的(dí)損(sǔn)傷(shāng)。因此(cǐ)采(cǎi)用(yòng)普(pǔ)通冰(bīng)箱(xiāng)冷凍保存菌種的效果往往遠(yuǎn)低於超低(dī)溫冰箱，應(yīng)注(zhù)意(yì)經常檢查保(bǎo)藏物(wù)的存活情況，隨時轉種。

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