抗凍蛋(dàn)白(bái)zui早在南極(jí)魚類中(zhōng)發現
，是(shì)一類能夠抑製冰(bīng)晶生(shēng)長的特殊(shū)蛋白.由於(yú)抗(kàng)凍(dòng)蛋白分布(bù)的(dí)不普(pǔ)遍性(xìng)
，很(hěn)難從特定幾(jī)種植物中找到
，並且傳(chuán)統的(dí)質(zhì)外體提(tí)取(qǔ)技術難(nán)掌握
。

   先將液氮(dàn)保(bǎo)存的高山冰緣(yuán)植物葉片(piàn)高(gāo)山紅景天
，高(gāo)山早熟(shú)禾
，高(gāo)山離(lí)子(zǐ)芥
，株(zhū)芽(yá)蓼利(lì)用液氮進行研(yán)磨(mó)
，研(yán)磨(mó)得到的粉末用(yòng)PH8.0磷(lín)酸(suān)緩衝液(yè)混(hùn)匀
，並12000g離心10分鐘(zhōng)
，取上(shàng)清(qīng)
，此(cǐ)為可溶(róng)性蛋白粗(cū)提液
，將45毫升粗提(tí)液放(fàng)入(rù)50毫(háo)升小燒(shāo)杯5在(zài)層析(xī)冷(lěng)櫃(guì)低溫4℃保(bǎo)存待用
。用高壓(yā)氮氣通過減(jiǎn)壓閥門(mén)2以(yǐ)0.1兆帕(pà)壓(yā)力順導(dǎo)管(guǎn)3流經(jīng)液(yè)氮進(jìn)行探頭(tóu)預冷(lěng)
，探(tàn)頭浸入(rù)含(hán)蛋(dàn)白(bái)粗提液(yè)的50毫升小燒杯5進(jìn)行(háng)凍冰吸(xī)附
，內(nèi)放(fàng)轉(zhuǎn)子進行磁力(lì)攪拌(bàn)保(bǎo)持溶液(yè)均(jūn)匀(yún)
。

  當(dāng)燒杯(bēi)內(nèi)液麵下降5毫升(shēng)後(hòu)取(qǔ)出(chū)凍(dòng)冰(bīng)探頭(tóu)7
，室(shì)溫(wēn)融化冰晶
，補(bǔ)加磷(lín)酸緩(huǎn)衝液(yè)至(zhì)45毫(háo)升
，重復用探頭(tóu)凍冰吸附一(yī)次
。第(dì)二次(cì)凍(dòng)冰的(dí)冰晶(jīng)室溫融(róng)化
，利(lì)用截流量5000道爾頓的(dí)透析袋在(zài)無(wú)離子水(shuǐ)中(zhōng)脫鹽12小時(shí)
，每(měi)隔(gé)2小時換水(shuǐ)
，脫(tuō)鹽後透(tòu)析袋(dài)埋(mái)入PEG8000的粉(fěn)末中濃縮
。濃縮後的(dí)蛋白溶(róng)液(yè)用(yòng)用(yòng)考馬(mǎ)斯(sī)亮藍(lán)G250比色法(fǎ)測定(dìng)濃(nóng)度
，用(yòng)BSA做(zuò)標(biāo)準曲綫
。將(jiāng)定(dìng)量後的(dí)蛋(dàn)白用(yòng)20％蔗(zhè)糖溶液稀(xī)釋成1mg/L和5mg/L濃度(dù)
，滴(dī)加(jiā)到(dào)一載(zǎi)玻片(piàn)
，覆蓋(gài)一(yī)蓋(gài)玻片壓(yā)成(chéng)均(jūn)匀液(yè)膜
。將製(zhì)片(piàn)放入(rù)上海(hǎi)田楓(fēng)-70℃超低(dī)溫(wēn)冰箱內30分鐘凍冰(bīng)後
，通過塑料(liào)泡沫(mò)板13操(cāo)作(zuò)入口迅速(sù)將製片(piàn)11放到顯(xiǎn)微(wēi)鏡9載物台(tái)
，通(tōng)過照相目鏡子10操作觀(guān)察口(kǒu)觀(guān)察(chá)中向蓋玻(bō)片(piàn)上加(jiā)一(yī)滴(dī)二甲(jiǎ)苯
，100倍(bèi)油(yóu)鏡觀察(chá)
，調整(zhěng)視(shì)野
，重(zhòng)結晶15分鐘後放(fàng)上照(zhào)相機照(zhào)相(xiāng)記(jì)錄
，發現(xiàn)高山(shān)離(lí)子芥(jiè)和(hé)株芽蓼具(jù)有抑製重結晶(jīng)的活性.

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