抗(kàng)凍蛋(dàn)白(bái)zui早在南極魚類(lèi)中發現(xiàn)，是一(yī)類能(néng)夠抑製(zhì)冰晶(jīng)生長(cháng)的(dí)特(tè)殊(shū)蛋白(bái).由於抗(kàng)凍蛋白分(fēn)布的不普遍(biàn)性(xìng)，很難從特(tè)定幾種植物中找到，並且傳統的(dí)質外體提取技術難掌(zhǎng)握(wò)。

   先將液(yè)氮保存(cún)的(dí)高山(shān)冰緣植物(wù)葉(yè)片高山紅景天，高山(shān)早(zǎo)熟禾，高山離(lí)子(zǐ)芥，株(zhū)芽蓼利用(yòng)液(yè)氮(dàn)進行(háng)研磨(mó)，研(yán)磨(mó)得(dé)到(dào)的粉末用PH8.0磷酸緩衝(chōng)液(yè)混匀，並12000g離心10分鐘(zhōng)，取上(shàng)清(qīng)，此(cǐ)為可溶(róng)性蛋白粗提液，將45毫升(shēng)粗(cū)提(tí)液(yè)放入(rù)50毫(háo)升小燒杯(bēi)5在層析(xī)冷櫃(guì)低(dī)溫4℃保存(cún)待(dài)用(yòng)。用(yòng)高壓(yā)氮氣(qì)通(tōng)過減壓閥(fá)門2以(yǐ)0.1兆(zhào)帕壓力順導(dǎo)管(guǎn)3流經液(yè)氮進(jìn)行探(tàn)頭(tóu)預冷，探(tàn)頭(tóu)浸入含蛋(dàn)白粗(cū)提(tí)液(yè)的50毫升小燒杯(bēi)5進(jìn)行凍冰吸附(fù)，內(nèi)放(fàng)轉(zhuǎn)子(zǐ)進行磁力攪(jiǎo)拌保(bǎo)持(chí)溶液(yè)均匀。

  當燒杯內液(yè)麵下(xià)降5毫升(shēng)後(hòu)取(qǔ)出(chū)凍冰探頭7，室溫(wēn)融化冰(bīng)晶(jīng)，補加磷(lín)酸緩衝(chōng)液(yè)至45毫(háo)升，重復用探頭凍冰(bīng)吸(xī)附一次(cì)。第二(èr)次凍冰的冰晶(jīng)室溫融(róng)化(huà)，利用(yòng)截流(liú)量5000道爾頓(dùn)的(dí)透(tòu)析袋(dài)在(zài)無(wú)離子水中(zhōng)脫鹽(yán)12小(xiǎo)時，每(měi)隔(gé)2小時換水(shuǐ)，脫(tuō)鹽(yán)後(hòu)透(tòu)析袋(dài)埋(mái)入(rù)PEG8000的粉(fěn)末中(zhōng)濃(nóng)縮。濃縮後(hòu)的蛋(dàn)白溶液(yè)用用考馬斯(sī)亮(liàng)藍G250比色(sè)法(fǎ)測(cè)定(dìng)濃(nóng)度，用(yòng)BSA做標準(zhǔn)曲(qū)綫。將定量後的(dí)蛋白(bái)用(yòng)20％蔗(zhè)糖溶(róng)液稀釋成(chéng)1mg/L和(hé)5mg/L濃度，滴加(jiā)到一(yī)載(zǎi)玻片，覆(fù)蓋一蓋(gài)玻片壓成均(jūn)匀(yún)液膜。將(jiāng)製(zhì)片放(fàng)入上(shàng)海(hǎi)拓紛(fēn)-70℃超(chāo)低溫(wēn)冰箱(xiāng)?內(nèi)30分鐘凍冰後，通過塑料(liào)泡沫板13操(cāo)作入(rù)口迅速(sù)將(jiāng)製片11放到顯微(wēi)鏡(jìng)9載(zǎi)物(wù)台(tái)，通過(guò)照(zhào)相目(mù)鏡子10操(cāo)作(zuò)觀(guān)察口(kǒu)觀察中(zhōng)向(xiàng)蓋玻(bō)片(piàn)上加(jiā)一滴二甲苯(běn)，100倍油(yóu)鏡(jìng)觀(guān)察(chá)，調整視野(yě)，重(zhòng)結(jié)晶(jīng)15分(fēn)鐘後放上照相機(jī)照相記錄，發(fā)現(xiàn)高山離子芥和(hé)株(zhū)芽蓼(liǎo)具有抑(yì)製(zhì)重(zhòng)結晶(jīng)的活性(xìng).

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